El linfoma de células del manto (LCM) es un linfoma agresivo que se caracteriza por la translocación t(11;14)(q13;q32) y sobreexpresión de CCND1. Tradicionalmente se ha considerado que la acción oncogénica de CCND1 esta relacionada con su papel en G1/S. Sin embargo, observaciones recientes sugieren que CCND1 podría tener efectos oncogénicos adicionales. El objetivo del proyecto es caracterizar el papel de CCND1 en la regulación transcripcional, la respuesta de daño en el ADN (DDR) y en la generación de estrés replicativo en LCM. Estableceremos modelos celulares con sobreexpresión exógena de CCND1 en células B normales inmortalizadas y en líneas celulares de neoplasias linfoides de células B. La interacción de ciclina D1 con la cromatina se analizará mediante ChIP-Seq en estos modelos y en líneas celulares de LCM. También describiremos los perfiles transcripcionales asociados a la sobreexpresión exógena de CCND1 mediante microarrays. El papel de CCND1 en DDR lo analizaremos en células con sobreexpresión exógena de CCND1 y en líneas celulares de LCM con silenciamiento de CCND1 sometidas a tratamientos que generen estrés o daño genómico. El daño en el ADN, el efecto en ciclo celular y la activación de DDR se determinarán mediante marcadores analizados por inmunofluorescencia, citometría de flujo y western-blot. Se analizará la expresión inmunohistoquímica de marcadores de DDR en tumores primarios y los datos se correlacionarán con las caracteríticas clinicopatológicas de los tumores. Utilizaremos la metodología molecular combing DNA para analizar la capacidad de CCND1 de generar estrés replicativo y la acumulación de alteraciones cromosómicas se estudiará con CGH-arrays.

CCND1
linfoma de células del manto
LCM
ChIP-Seq
estrés replicativo
inestabilidad genómica
DNA-Seq
secuenciación del ADN