Objetivos: 1) Cuantificar la frecuencia y capacidad efectora de linfocitos T citotóxicos (LTC) específicos contra antígenos asociados a hepatocarcinoma (AAH) en el compartimento periférico e intrahepático de pacientes con hepatocarcinoma (HC), 2) Analizar el fenotipo asociado a agotamiento y apoptosis en estas células y su relación con la expresión del cluster miR 17-92, 3) Analizar el efecto del bloqueo in-vitro con anti-miR del cluster miR 17-92 sobre la capacidad efectora de LTC específicos contra AAH. Metodología: En pacientes con HC HLA-A2+ se aislaran células mononucleares de sangre periférica (CMSP) e hígado (CMIH). Se cuantificará la frecuencia de LTC-AAH específicos (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) y LTC-citomegalovirus (CMV) específicos (pp65 495-504) [Grupo control], mediante marcaje de CMSP y CMIH con complejos multiméricos HLA-A2/epítopo y anticuerpos anti-CD8. Se utilizará la técnica TAME ( Tetramer associated magnetic enrichment ) que permite detectar células con frecuencia>10-7 respecto al total de CMSP. En estas células se analizará el fenotipo asociado a agotamiento (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosis (Mcl-1, Bim) y se evaluarán las capacidades efectoras (proliferación antígeno específica, producción de interferón-? y citotoxicidad (CD107a)). Estos análisis se realizaran mediante citometría de flujo. Mediante técnica de sorting se aislaran LTC-AAH específicos para obtener su RNA y tras retro-transcripción a cDNA, se amplificará el cluster miR 17-92. Se corelacionará la expresión del cluster miR 17-92 con el fenotipo de agotamiento y apoptosis. En caso de observarse una corelación positiva entre estos fenotipos y el cluster miR 17-92, se bloqueará in-vitro el cluster miR 17-92 con anti-miR apropiados para restaurar la actividad efectora de los LTC-AAH específicos.

hepatocarcinoma
respuesta celular citotóxica específica
miR-17-92
terapia celular adoptiva
cúmulo de diferenciación CD127
proteína de la muerte celular programada
proteína PD-1
proteína Bim
proteína Mcl-1
gen TRAF1

Acción Estratégica en Salud (AES)