El desarrollo reciente de las nucleasas específicas (NE) (Meganucleasas, ZFNs, TALEN, CRISPR), capaces de generar cortes de doble cadena específicos, ha revolucionado la investigación biomédica. Esta tecnología permite re-escribir el genoma, posibilitando el abordaje de estrategias de terapia génica (TG) para numerosas patologías. De entres todas las enfermedades que se pueden beneficiar de estas estrategias, las inmunodeficiencias primarias (IP) son una de las mejores candidatas, debido a la posibilidad de editar las células hematopoyéticas progenitoras humanas (hCHPs). En particular, el síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una de los IP donde la edición génica (EG) tiene un mayor potencial debido a la ventaja selectiva de las células corregidas. Sin embargo antes de su aplicación clínica es necesario optimizar estas herramientas para lograr mejores eficiencias y especificidades. Por lo tanto nuestros objetivos en este proyecto son: 1 Desarrollar herramientas basadas en el sistema CRISPR para la edición génica del locus WAS en CHPs. Se desarrollarán sistemas altamente específicos y eficientes para reparar las mutaciones presentes en el gen WASP (el gen mutado en el WAS). Para ello se utilizarán diferentes vectores para la entrega de las NE y los ADN donadores (conteniendo la versión correcta del gen WASP) dentro de las HSCs.2- Analizar la eficiencia y seguridad de las herramientas desarrolladas para el rescate genético de células CHPs WASPKO. Debido a la escasez de pacientes con WAS y a la dificultad de obtener CHPs de los mismos, se desarrollarán dos modelos diferentes: - Células CHPs derivadas de cordón umbilical mutadas para WAS mediante edición génica. - Células CHPs derivadas de hESCsWASPKO. Finalmente se procederá a analizar la eficiencia de repararación del locus WASP en estas células, así como los potenciales efectos deletéreos que la edición génica pudiera provocar en las HSCs.

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