Las leucemias mieloides agudas(LMA) son procesos neoplásicos complejos originados por un número limitado de mutaciones adquiridas que son susceptibles de poder ser analizados con dispositivos de secuenciación de uso clínico. Las LMA presentan con frecuencia subpoblaciones celulares que se pueden distinguir por su patrón antigénico y que se supone está relacionado con los grados de maduración y con los procesos de variación adaptativa propia de las células tumorales. En este estudio pretendemos analizar las correlaciones fenotípicas/genotípicas de subpoblaciones en LMA. Identificación mediante citometría de flujo multiparamétrica de subpoblaciones leucémicas en casos de LMA de novo (50 pacientes) y en muestras en recaída (10 pacientes) (patrones de CD34, HLA-Dr, CD15, CD117, CD123, CD45, CD33, CD13, CD56, CD36 y CD71). Separación celular utilizando sorting convencional (FACSARIA) y dispositivos individuales de presión (cartuchos de Fluxion). Expansión en frascos de cultivo de celularidad adherente obtenida de médula ósea en los casos con LMA. Purificación de ácidos nucleicos de las diferentes fracciones, de la muestra cruda no purificada y de los fibroblastos de médula ósea. Generación de librerías y resecuenciación utilizando panel Trusight mieloide (Illumina) y custom panel mieloide Iontorrent (ThermoFisher). Identificación y cuantificación de variantes. Validación en casos seleccionados mediante técnica de Sanger, comparación con la línea germinal y análisis de patogenicidad in silico. Estableciemiento de correlaciones clínicas y pronósticas. Generación de modelos de LMA xenógrafos en ratones inmunodeficientes (NSG) por infusión celular de LMA primarias, pase a recipientes secundarios y evaluación de los implantes mediante análisis genotípicos utilizando las técnicas antes descritas.

leucemias mieloides agudas
inmunofenotipo
subpoblaciones
secuenciación
modelo murino