En el presente proyecto de investigación se proponen diferentes estrategias para abordar un mejor conocimiento de la regulación de FRBZ, pues resultados previos muestran posibles efectos beneficiosos in vitro tras su silenciamiento, y así poder orientar los estudios a futuras terapias en las distrofias de cinturas tipo 2A. Objetivos: 1) Establecer las funciones específicas de FRZB en el músculo analizando su ausencia en modelo in vivo de ratón KO Frzb-/-. 2) Establecer las consecuencias del silenciamiento o la sobreexpresión de FRZB in vivo en el pez cebra. 3) Profundizar en los mecanismos en los que participa el silenciamiento de FRZB en cultivos primarios humanos para establecer las consecuencias en diferentes procesos celulares. Metodología: Se utilizarán muestras de músculo y mioblastos/miotubos de ratón KO Frzb-/- en los que se analizará la expresión diferencial de genes (RT-qPCR) y proteínas (Western Blot). Se analizará también la estructura muscular (actividad enzimática de metaloproteinasa) como la capacidad regenerativa del músculo in vivo tras administración de cardiotoxina y se realizará posterior análisis histológico. En el pez cebra, el gen Frzb se silenciará (morfolinos) y se sobreexpresará (pGEM-T) para establecer las consecuencias de su desregulación. Finalmente se utilizarán cultivos celulares (mioblastos/miotubos) de pacientes LGMD2A y controles en los que se determinará la regulación diferencial de kinasas, la autofagia y la función mitocondrial como consecuencia del silenciamiento de FRZB. Para el control del efecto de todos los ensayos, se analizará la expresión de diferentes genes/proteínas, la modificación en la fosforilación de kinasas, así como los ratios de absorción de oxígeno y la producción de protones y la acidificación extracelular (SeaHorse).

distrofia muscular de cinturas tipo 2A
LGMD2A
proteína FRZB
expresión génica
autofagia
homeostasis
fibra muscular