La Epidermolisis Bullosa (EB) comprende a un grupo heterogéneo de enfermedades raras de fragilidad caracterizadas por la formación de ampollas cutáneas, espontáneas o inducidas por un trauma mínimo. La forma distrófica recesiva, severa generalizada de la EB (EBDRsev-gen), causada por mutaciones nulas en el gen COL7A1 que codifica para la proteína Colágeno VII (C7), no tiene cura y las terapias disponibles son sólo paliativas y de eficacia marginal. La terapia génica (TG) es una opción terapéutica válida capaz de restituir la expresión de C7 en células EBDR independientemente de la mutación causal en COL7A1. Recientes avances en TG están haciendo posible la corrección precisa (edición) de genes utilizando nucleasas dirigidas. En el marco del proyecto anterior propusimos y testamos con éxito la edición génica utilizando nucleasas TALEN aplicadas a queratinocitos EBDR inmortalizados portadores de una mutación en COL7A1 recurrente en España, siendo los primeros en emplear la modalidad basada en reparación NHEJ para lograr recuperar la pauta de lectura y expresión del gen. Objetivos: En este proyecto proponemos el uso de nuevas herramientas y abordajes de edición más eficientes y su aplicación no sólo ex vivo sino también in vivo. Metodología: Concretamente proponemos caracterizar la eficiencia de nucleasas TALEN dirigidas específicamente al sitio de la mutación para lograr la corrección de precisión por NHEJ y del sistema CRISPR/Cas9 de doble guía para conseguir la escisión del exon 80 del COL7A1 donde reside la mutación, una estrategia que permite producir C7 funcional. En modelos fidedignos de EBDR en ratón con piel humanizada, ensayaremos el abordaje de edición más eficiente usando transferencia viral y no viral sobre los xenotrasplantes. Esperamos conseguir una eficaz re-expresión de C7 y una corrección del fenotipo de adhesión que nos acerque a la aplicación en pacientes.

terapia génica
enfermedad rara
epidermólisis ampollosa
epidermólisis bullosa