La leucemia mieloide crónica (LMC) es una hemopatía maligna provocada por la traslocación cromosómica t(9;22)(q34;q11). Esta traslocación genera una oncoproteína de fusión, BCR-ABL p210, con actividad tirosin quinasa (TK) constitutiva. Esta actividad es la responsable de la transformación maligna de la célula stem hematopoyética motivo por el cual el tratamiento actual consiste en la administración de inhibidores TK. Recientemente ha surgido una nueva aproximación terapéutica gracias a la implementación de las nuevas nucleasas de edición genómica CRISPR-Cas9. Esta tecnología está revolucionando el campo de la biomedicina y la genética ya que permite de forma sencilla y eficaz corregir a nivel genético distintas mutaciones patológicas. Un reciente estudio de nuestro grupo ha demostrado que es posible eliminar a nivel genético el oncogen de fusión BCR-ABL, mostrando que esta abolición genética bloquea la capacidad tumoral del oncogen en líneas celulares y experimentos xenografts. El objetivo de nuestro proyecto es aplicar esta misma tecnología en células primarias de pacientes afectos de LMC y en un modelo murino de LMC. Las células tratatadas con estas nucleasas CRISPR serán testadas en ensayos de transplante de médula ósea en ratones inmunodeficientes., Para llevar a cabo este proyecto utilizaremos: 1) líneas celulares humanas de LMC (LAMA84 y K562). En ellas testaremos la eficacia de nuestras guías de, RNA utilizadas por la CRISPR-Cas9. 2) Células CD34+ de pacientes LMC donde se utilizarán las guías elegidas en los experimentos con líneas celulares humanas. 3) Células Sca1+ leucémicas de un modelo LMC de ratón (Tg-Tec-p210) que rememora la LMC., Nuestro grupo tiene gran experiencia en la aplicación de técnicas CRISPR-Cas9 in vivo. La edición genómica de las distintas células se llevará a cabo mediante 1) Electroporación de vectores de expresión CRISPR-Cas9 o nucleofección con complejos RNP y/o 2) Utilización de vectores virales CRISPR-Cas9.

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