Objetivos: Estudiar la implicación del sistema de secreción tipo VI (T6SS) y el sistema de secreción de toxinas formadoras de poros de 2 componentes (TPS) ExlBA como marcadores de virulencia en cepas de P. aeruginosa provenientes de pacientes con neumonía asociada a la ventilación mecánica (NAV) en las unidades de cuidados intensivos (UCI), así como la contribución de estos dos sistemas a la severidad de la infección y su posible asociación con un mal pronóstico de la enfermedad. Metodología: Se estudiarán varias características fenotípicas de las cepas como la sensibilidad a varios antibióticos antipseudomónicos, la producción de hemólisis, las actividades alcalino-proteasa y elastasa, la producción de biopelículas y la movilidad tipo swarming, swimming y twitching. Se determinará la presencia y distribución del TPS-ExlBA así como de los distintos loci de T6SS y se establecerá un sistema de clasificación de cepas basado en los diferentes genotipos descritos (T3SS+, T3SS-/exlA+ y T3SSd/exlAB-). La relación clonal de las cepas se establecerá mediante PFGE, MLST y el array Clondiag. Se secuenciarán los genomas completos de una selección de cepas representativas de la población en estudio y se realizarán estudios genómico-comparativos y de filogenia que permitirán conocer más en detalle las características de estas cepas y de los diferentes sistemas estudiados. Se realizarán ensayos de mutagénesis y expresión de una selección de genes de T6SS y del gen exlA en diferentes entornos genéticos para determinar su implicación en la virulencia de P. aeruginosa utilizando modelos de infección in vitro e in vivo como Galleria mellonella y un modelo de neumonía de ratón.

neumonía asociada a ventilación mecánica
Pseudomonas aeruginosa
virulencia
sistema de secreción tipo VI
exolisina A

Acción Estratégica en Salud (AES)