Objetivos. El cáncer de mama/ovario hereditario es una enfermedad genéticamente heterogénea con más de 20 genes de susceptibilidad (BC/OC), la mayoría de los cuales participan en la ruta de reparación del ADN. Las alteraciones de splicing son un mecanismo prevalente de inactivación génica asociado con variantes germinales en genes BC/OC. El splicing alternativo (AS) de genes BC/OC y el reconocimiento de exones atípicos largos (PALB2 ex4,5/BRCA2 10,11) o con donadores GC (BRCA2 ex17) deben ser controlados con precisión, donde los enhancers (ESE/ISE) y silenciadores (ESS/ISS) de splicing juegan un papel clave. Por tanto, cualquier variante en estos motivos puede alterar el splicing y aumentar el riesgo de cáncer. Asimismo, el AS de los genes reparadores (incluyendo genes BC/OC) cambia en la respuesta a daño en el ADN (DDR). El objetivo central de esta propuesta es el estudio de la regulación del AS y los exones atípicos de genes BC/OC en condiciones fisiológicas y DDR, así como la caracterización de variantes “no canónicas” ESE/ESS espliceogénicas que confieren riesgo BC/OC. Objetivos específicos: 1) Mapeo funcional de elementos reguladores de splicing de exones alternativos y atípicos de genes BC/OC; 2) Identificación de variantes ESE/ESS espliceogénicas de los exones diana; 3) Regulación de exones alternativos y atípicos: Identificación de factores de splicing clave; 4) AS en DDR: a) Expresión diferencial de factores de splicing, b) Regulación del AS de genes BC/OC en la DDR. Métodos. El mapeo funcional de ESE/ESS y ensayos funcionales de variantes candidatas se realizarán en los minigenes: BRCA1/2, CHEK2, PALB2, ATM, RAD51C/D. La regulación del AS fisiológico y exones atípicos se estudiará mediante siRNAs y ensayos de unión a RNA. Los datos RNAseq del sub-proyecto A (normal vs. DDR) se emplearán para analizar la expresión de los factores de splicing. Su papel en la DDR se evaluará mediante experimentos de sobreexpresión/represión en minigenes wild type y mutantes.

Cáncer de mama y/o ovario
genes de susceptibilibilidad
Splicing
Variantes espliceogénicas
Splicing aberrante
Splicing alternativo
Regulación
minigenes
enhancers de splicing
silenciadores de splicing
Resuespa al Daño en el ADN