Objetivo general: Profundizar en el conocimiento de los mecanismos moleculares implicados en la heterogeneidad genética de la LLC, concretamente en los implicados en la progresión de la enfermedad y la respuesta al tratamiento, mediante la integración de un análisis multiómico y la edición genética en modelos celulares y murinos, así como células primarias de LLC. Objetivos concretos: 1) Identificar la concurrencia de eventos genéticos asociados con intermedio-mal pronóstico (trisomía 12 y 11q-) en linfocitos B clonales de pacientes de LLC 2) Determinar el impacto funcional de la concurrencia de dichos eventos genéticos en modelos celulares 3) Determinar la sensibilidad in vitro tanto de estos modelos como de los generados previamente (PI18/01500), así como en células primarias ex vivo, a los inhibidores de BCR y PI3K 4) Analizar el perfil genómico, transcriptómico, proteómico y fosfoproteómico de los modelos celulares de 11q- y de los pacientes de LLC e identificar posibles rutas celulares implicadas en la respuesta a inhibidores de BCR. 5) Identificar nuevos mecanismos implicados en la resistencia los inhibidores de BCR y PI3K en líneas celulares y definir las vulnerabilidades terapéuticas en las células con 11q- 6) Validar los resultados más prometedores en un modelo xenograft in vivo y en estudios ex vivo en células primarias de LLC. Metodología: Se analizarán los linfocitos B de pacientes de LLC al diagnóstico o tras la recaída. Se utilizarán también líneas celulares linfoblastoides generadas a partir de pacientes de LLC y, para los estudios in vivo, ratones NOD-SCID-IL2Rgamma (NSG). Se llevará a cabo un análisis multi-ómico combinando técnicas de ultrasecuenciación de ADN y ARN, y análisis proteómico. Además se realizará mutagénesis dirigida CRISPR/Cas9 y screening farmacológico con la librería human CRISPR Brunello knockout y cultivos celulares ex vivo en células primarias de LLC.

LLC
NGS
proteómica
CRISPR
edición genética
screening farmacológico
tratamiento
ibrutinib

Acción Estratégica en Salud (AES)