Las displasias ectodérmicas (DE) son un grupo de trastornos hereditarios caracterizados por el desarrollo defectuoso de dos o más derivados ectodérmicos (cabello, dientes, uñas, glándulas sudoríparas). Se han descrito más de 100 DE distintas, clínica y/o genéticamente. Este proyecto es continuación de PI14/01259 and PI17 /00796. Objetivos: 1. Aumentar el grupo de casos/familias con DE para caracterización fenotípica y análisis genético mediante el panel NGS-ED-v.2. 2. Selección de casos sin diagnóstico para caracterización molecular avanzada. Mapeo y clonación de nuevos genes DE usando técnicas de secuenciación masiva (NGS) y de tercera generación (TGS). 3. Desarrollo de modelos de DE in vivo e in vitro para realizar la caracterización de variantes genéticas candidatas. 4. Uso de los modelos de DE obtenidos en screening de reposicionamiento farmacéutico para de identificar compuestos que puedan mejorar el fenotipo. Métodos: 1. Reclutamiento de nuevos pacientes, caracterización clínica, muestras biológicas retrospectivas y prospectivas previo consentimiento informado. Extracción de ADN y, si es necesario, aislamiento de ARNm y queratinocitos inmortalizados. Análisis genético de ADN (secuenciación NGS-ED-v.2). En los casos de DE con etiología desconocida, se aplicará secuenciación de cadena larga de tercera generación (TGS) (tecnología de nanoporos) y / o NGS. Las variantes genéticas seleccionadas de significado clínica incierto serán validadas con análisis funcionales in vivo y/o in vitro. Modelo de pez cebra in vivo, 2 estrategias: comparación tras inyección de ARNm transcrito silvestre de EDA, EDAR, WNT10A que induce la señalización de NFkB y de ARNm que alberga las mutaciones; y uso de la tecnología CRISPR-Cas9 para generar animales KO. Modelos in vitro: inmortalización de queratinocitos de pacientes y generación de modelos celulares. Los linajes KO de pez cebra se utilizarán para evaluar el efecto de una biblioteca de fármacos SCREEN-WELL® FDA (770 compuestos).

Displasia ectodérmica
secuenciación tercera generación
NGS
modelo pez cebra
modelo celular
reposicionamiento de fármacos

Acción Estratégica en Salud (AES)