El objetivo principal es realizar un estudio de descubrimiento de biomarcadores moleculares (proteínas) de endotipos específicos de asma en muestras poco invasivas (orina y suero) con el fin de mejorar el diagnóstico/pronóstico y el tratamiento del asma. Para ello, utilizaremos muestras de adultos sanos (N=30) y pacientes con asma moderada-grave (N= 60) con diferentes fenotipos (alérgico/no alérgico; T2alto/T2bajo). En primer lugar, caracterizaremos el fenotipo inmunitario de los donantes mediante citometría de flujo, incluyendo el estudio de subpoblaciones de eosinófilos, monocitos, neutrófilos, células linfoides innatas (ILC), células T helper (TH1, TH2 y TH17), gammadelta-T y MAIT de sangre periférica. Seguidamente, reclasificaremos a los pacientes en endotipos basándonos en los datos anteriores (clustering). A continuación, estudiaremos el proteoma urinario libre de exosomas y el proteoma urinario de exosomas mediante LC-MS/MS, además de la abundancia diferencial de proteínas entre los distintos fenotipos y endotipos de estudio mediante LC-SWATH-MS. A continuación, se utilizarán inmunoensayos (p.ej., ELISA, western blot) y técnicas proteómicas dirigidas (p. ej., MRM) para validar los biomarcadores descubiertos en orina durante el presente estudio, así como otros encontrados en proyectos FIS anteriores (PI13/02046; PI17/01655). Para ello, utilizaremos muestras de suero y orina recogidas en este estudio y muestras de suero de estudios previos (PI13/02046 y PI17/01655; N=62 sanos; N=387 asmáticos). Por último, los biomarcadores también se validarán funcionalmente utilizando diferentes modelos in vitro de asma.

Asma
Biomarcadores
Citometría de flujo
Diagnóstico
Endotipos
Fenotipos
Leucocitos
Orina
Proteómica
Patogénesis
Suero.

Acción Estratégica en Salud (AES)